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MUTAGENESE CASSETTE [1 fiche]

Fiche 1 2010-06-01

Anglais

Subject field(s)
  • Biological Sciences
DEF

Site-directed mutagenesis technique based on the use of an oligodeoxynucleotide cassette (a synthetic double-stranded DNA fragment). The strategy involves the introduction of unique silent restriction sites designed to closely flank the target codon. Digestion with appropriate restriction enzymes produce a gap that can be filled with a duplex synthetic oligonucleotide cassette. The cassette is designed to restore the coding sequence in the gap and to introduce an altered target codon.

Français

Domaine(s)
  • Sciences biologiques
DEF

Technique de mutagénèse dirigée in vitro qui consiste à créer dans le gène une "cassette" encadrée par deux sites d'enzyme de restriction. Il est ensuite aisé de remplacer cette cassette par une autre, constituée de deux brins d'ADN synthétique, pour introduire la mutation que l'on veut dans la zone de la cassette. Les deux sites de restriction seront souvent obtenus par mutagénèse dirigée.

OBS

Cette méthode est très efficace, puisque l'on ramène la mutagénèse à un simple clonage, et se prête bien à l'exploration systématique de la séquence d'une petite protéine dont on aura éventuellement synthétisé tout le gène (cas du tPA), ou d'une zone définie d'une protéine plus grosse, comme les zones hypervariables des anticorps par exemple.

Espagnol

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