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MUTAGENESE DIRIGEE AIDE OLIGONUCLEOTIDE SYNTHETIQUE [1 fiche]

Fiche 1 2010-05-19

Anglais

Subject field(s)
  • Biological Sciences
CONT

The most suitable technique at present for the precisely targeted mutation of genes is oligodeoxynucleotide-directed mutagenesis.... Procedures for oligonucleotide-directed in vitro mutagenesis are used most appropriately for making small insertions, deletions, and substitutions of nucleotides at single specific sites in cloned genes.... Oligodeoxynucleotide-directed mutagenesis allows the systematic replacement of every single amino acid residue in a protein in turn.

Français

Domaine(s)
  • Sciences biologiques
CONT

La mutagénèse dirigée à l'aide d'un oligonucléotide synthétique [...] qui permet de diriger une mutation, nécessite tout d'abord la connaissance de la séquence nucléotidique du gène cloné. [...] Il reste à choisir l'endroit précis du gène où l'on veut créer une mutation ainsi que la nature de cette mutation. Le chercheur synthétise un oligomère de 15-20 nucléotides contenant la séquence modifiée sur une ou plusieurs bases. [...] Le fragment d'ADN est alors hybridé au gène cloné dans des conditions où l'hybride est stable malgré le mauvais appariement dû à la base changée. [...] Dans certaines conditions de température, l'oligomère forme un hybride stable avec l'ADN muté qui lui est parfaitement complémentaire, alors que l'hybride avec l'ADN est instable car une base ne peut se réapparier. Ces techniques d'hybridation différentielle sont suffisamment fines pour distinguer sans ambiguïté les deux types de clones.

Espagnol

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