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PCR INVERSE [4 fiches]

Fiche 1 2015-04-20

Anglais

Subject field(s)
  • Genetics
  • Molecular Biology
CONT

It is a technique used in genetic studies that allows the detection and quantification of mRNA [messenger ribonucleic acid] It is a very sensitive method that shows whether or not a specific gene is being expressed in a given sample. RT-PCR is a very important test in the field of Genetically-Modified Organisms (GMO's) because it gives researchers a mechanism to test whether any specific gene is turned on (active) or turned off (inactive). This allows researchers to identify the benefits of genetically-modified organisms with respect to their "natural" counterparts and search for any significant differences in which genes are expressed in the two types of organisms.

Français

Domaine(s)
  • Génétique
  • Biologie moléculaire
CONT

La PCR et la RT-PCR(reverse transcriptase PCR) permettent la synthèse de millions de copies d’un segment spécifique d’ADN ou d’ARN(après une étape de transcription inverse permettant la synthèse d’un ADNc), grâce à une succession de réactions se faisant à différentes températures : dénaturation de l'ADN cible par rupture des liaisons hydrogène à 94° C, hybridation des amorces sur une séquence complémentaire d’un des brins d’ADN au niveau 3’(entre 37 °C et 68 °C), élongation(à 72 °C le plus souvent) grâce aux dNTP ajoutés dans le milieu réactionnel et à une enzyme thermostable à activité ADN polymérase(Taq polymérase).

OBS

Technique de transcription inverse suivie de réaction en chaîne de la polymérase.

Espagnol

Campo(s) temático(s)
  • Genética
  • Biología molecular
OBS

[...] la reacción en cadena de la polimerasa-transcriptasa inversa. Se utiliza para la detección y amplificación de ARN, permite estudiar la expresión de determinados genes (su traducción a proteínas).

Conserver la fiche 1

Fiche 2 1997-03-20

Anglais

Subject field(s)
  • Genetics

Français

Domaine(s)
  • Génétique
CONT

Cette technique consiste à effectuer une PCR à partir d’un ARN préalablement transcrit en ADNc en présence d’une transcriptase inverse(extraite de rétrovirus tels que les Mo-MLV, A-MV ou encore M-MTV) et d’une amorce(oligo-dT, hexamères ou amorce spécifique de l'ARN cible).

OBS

Technique d’amplification génique in situ en présence d’une transcriptase inverse.

Espagnol

Conserver la fiche 2

Fiche 3 1996-07-12

Anglais

Subject field(s)
  • Genetics
DEF

Technique that can be employed in the determination of an unknown sequence that flank a region of known sequences.

OBS

The template target sequence is digested with a suitable restriction enzyme that cuts the template outside the known sequence but in the region of the unknown sequence. PCR is carried out using two primers which anneal to the ends of the known sequence but reversed in their direction with respect to their normal orientation in a normal PCR reaction. This leads to the amplification of the region of the unknown sequence.

Français

Domaine(s)
  • Génétique
CONT

Le principe même de la mutagénèse dirigée par IPCR nécessite la purification préalable des oligonucléotides utilisés. En effet, la présence de formes n-1, n-2 ou n-x même très minoritaire induirait la formation de mutations supplémentaires par délétion de une, deux ou x bases ors de 12 PCR.

CONT

Le produit final d’une PCR inverse(amorces tête-bêche) est phosphoryle ligué et transformé.

Espagnol

Conserver la fiche 3

Fiche 4 1996-07-12

Anglais

Subject field(s)
  • Genetics
DEF

A restriction-site independent, single-fragment method for high-efficiency, site-directed mutagenesis.

CONT

Enzymatic inverse PCR mutagenesis was developed as a sample and reliable method for the construction of large libraries of site-directed mutants. Enzymatic inverse PCR library mutagenesis uses a single PCR fragment and is restriction-site independent. The usefulness of the technique was demonstrated by the design of a ling. The FV fragment of an antibody specific for a metal chelate was expressed in active form in the penplasma of E. coli.

Français

Domaine(s)
  • Génétique
CONT

Inverse PCR pour laquelle des sites de restriction de classe IIS sont introduits dans les deux amorces. Après PCR, les extrémités du vecteur linéarisé produits sont clivés par l'enzyme de classe IIS. Après ligation, le vecteur recircularisé est transformé.

Espagnol

Conserver la fiche 4

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